GBZ_T 249-2014 荧光原位杂交分析染色体易位估算辐射生物剂量技术方法
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ID： |
03E4FB786BC74E4191846E4484AF62B7 |
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文件大小(MB)： |
1.11 |
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15 |
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文件格式： |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 13. 100,C 60 GBZ,中华人民共和国国家职业卫生标准,GBZ/T 249—2014,荧光原位杂交分析染色体易位估算,辐射生物剂量技术方法,Method of dose estimation using chromosome translocation with,fluorescence in situ hybridization,2014-0574 罗布2014-10-01 实施,中华人民共和国分布,国家卫生和计划生育委员会友布,GBZ/T 249—2014,刖 百,根据《中华人民共和国职业病防治法》制定本标准,本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草,本标准起草单位:中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所、军事医学科学院放射与医学研,究所和河南省职业病防治研究院,本标准起草人:刘青杰、陆雪、赵骅、陈英、吕玉民,Q1,GBZ/T 249—2014,荧光原位杂交分析染色体易位估算,辐射生物剂量技术方法,1范围,本标准规定了用荧光原位杂交分析外周血淋巴细胞染色体易位,对电离辐射外照射受照人员的生,物剂量进行估算的技术方法,本标准适用于单色荧光素直接标记探针的染色体涂染方法。适用于发生在!0年内、剂量在,0.2 Gy.5 Gy范围内、急性全身均匀或近似均匀照射的事故受照人员回顾性剂量估算,也可用于受过,量外照射人员的生物剂量估算,本标准不适用于慢性职业受照人员、非均匀照射、内照射、剂量大于5 Gy或发生时间大于10年的,急性照射的剂量估算,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 28236染色体畸变估算生物剂量方法,WS/T 204用稳定性染色体畸变估算职业受照者剂量的方法,3术语和定义,GB/T 28236和WS/T 204界定的以及下列术语和定义适用于本文件,3. 1,荧光原位杂交 fluorescence in situ hybridization；FISH,非放射性原位杂交的ー种。将变性后的标记核甘酸探针（包括直接与荧光素结合的直接标记探针;,用生物素、地高辛等标记的间接标记探针）与变性后的染色体、细胞中的核酸按照碱基互补配对原则进,行杂交,经洗脱后直接分析或通过免疫荧光系统检测,最后在荧光显微镜下观察,3.2,染色体易位 chromosome translocation,两条染色体断裂后，相互交换染色体的远侧部分,形成两条具有着丝粒的衍生染色体的染色体畸,变。有时交换是不完全的，还可以产生一对无着丝点断片,3.3,染色体涂染 chromosome painting,用染色体特异性DNA文库作为探针池（全染色体探针）,可涂染整条染色体的荧光原位杂交方法,3.4,剂量-效应曲线 dose-effect curve,某种生物体系受到照射后的反应与受照射剂量之间存在着某种定量关系,可用适当的数学模式表,述,制备出相应的刻度曲线,可用其估算受照射剂量,1,GBZ/T 249—2014,4荧光原位杂交标本制备,4. !仪器和设备,涉及的主要仪器和试剂配制详见附录A,4.2 染色体标本制备,4.2 . 1样品接种和细胞培养,用0.5 mL肝素抗凝全血加入到4.0 mL含有20%胎牛血清的RPM1 1640全培养基中,每个样品,设2个平行样,培养48 h.54 h,4.2.2 收获细胞,用吸管吹打培养物,转入15 mL刻度离心管,水平离心机250 g离心10 min,弃去上清，约留1 mL,剩余沉淀物,4.2.3 低渗,每离心管中加入37 ℃预温的0.075 mol/L KC1至8 mL.10 mL,用吸管吹打均匀,置37 ℃水浴,中 30 min?,4.2.4 预固定,每离心管中加入2 mL新配制的固定液［甲醇:冰乙酸=3 ： 1（体积分数）コ,用吸管轻轻吹吸混匀,250 g离心!0 min,弃去上清,4.2.5 固定,每离心管中加入6 mL固定液,轻轻吹吸混匀,室温固定20 min,250 g离心!0 min,弃去上清,4.2.6 第二次固定,加入6 mL固定液，轻轻吹吸混匀,固定15 min,250 g离心10 min,弃去上清,4.2.7 细胞悬液的制备,适于制片的细胞悬液在混匀后应是均匀乳白色的,细胞悬液的颜色较深时可再重复4. 2. 6步骤,1.2次。弃去部分上清,留适量上清并混匀,4.2.8 制片,制片时将1.2滴细胞悬液滴在经无水乙醇处理、无尘纸擦洗干净的玻片上,湿热条件下使细胞和,染色体均匀散开,室温空气自然干燥,4.2.9 染色体标本质量的检定,在相差显微镜下,中期染色体应是中等灰色、轮廓清楚、分散良好、很少或没有肉眼可见的细胞质,可通过调节制片的温度、湿度水平、细胞悬液的浓度，以得到最理想的中期分裂相,2,GBZ/T 249—2014,4.3染色体标本预处理,4. 3. 1 RNA酶处理,用平衡磷酸盐缓冲溶液（PBS）在室温下洗5 min;在每个冰乙醇浓度中脱水5 min;室温空气自然,干燥。取!00 mL RNA酶工作液加到标本上,盖上24 mmX50 mm的盖玻片,37 ℃湿盒中放置1 h,用2XSSC（标准柠檬酸盐ー氯化钠液）室温条件下洗3次，每次5 min；冰乙醇系列脱水，60 °C电热板上,放置30 min,4.3.2 蛋白酶处理,染色体标本用RNA酶预处理后,杂交检测后仍有非常多的背景荧光信号,同一批标本就需要蛋白,酶处理。将100 fzL 37 ℃预温的0. 005%的胰……
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